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延遲培養(yǎng)法可以允許水樣經(jīng)濾膜過濾后，將濾膜裝運(yùn)、輸送到實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行培養(yǎng)并完成檢驗(yàn)。在常規(guī)的檢驗(yàn)步驟不能實(shí)現(xiàn)時(shí)，例如在水樣運(yùn)輸?shù)耐局胁荒鼙ＷC所要求的溫度，或者在采樣后不能在允許的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行檢驗(yàn)等都可應(yīng)用延遲培養(yǎng)。

延遲培養(yǎng)法和標(biāo)準(zhǔn)的濾膜法比較表明兩者的數(shù)據(jù)可以相符。延遲培養(yǎng)試驗(yàn)基本上是依照檢驗(yàn)總大腸菌群的濾膜法進(jìn)行修正而來的。此法是將水樣在現(xiàn)場(chǎng)過濾后，將濾膜置于培養(yǎng)基上，然后運(yùn)到實(shí)驗(yàn)室。這種運(yùn)送濾膜的培養(yǎng)基能在運(yùn)輸過程中保持大腸菌群細(xì)菌的活性，但又不允許它們?cè)谶\(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室的途中長成可見的菌落。

延遲培養(yǎng)試驗(yàn)兩種可選擇的方法是M-遠(yuǎn)騰氏法和LES法。

1．培養(yǎng)基

(1) M-遠(yuǎn)騰氏法

OM-遠(yuǎn)騰氏培養(yǎng)基。

OM-遠(yuǎn)騰氏防腐培養(yǎng)基：按M-遠(yuǎn)騰氏培養(yǎng)基配制，每升再加3.84g苯甲酸鈉。另外，要根據(jù)水樣情況來決定是否把環(huán)己亞胺加到M-遠(yuǎn)藤氏防腐培養(yǎng)基中。如己發(fā)現(xiàn)有蔓生霉菌或真菌的水樣，按每100m1M-遠(yuǎn)藤氏防腐培養(yǎng)基加入50mg環(huán)己亞胺。

(2) LES法

①LES-MF保存性培養(yǎng)基。

② LES遠(yuǎn)藤氏瓊脂培養(yǎng)基。

2．步驟

(1)采樣前的準(zhǔn)備

①過濾裝置：以無菌操作把濾器裝置裝好。

②水樣量的選擇：待過濾水樣量是根據(jù)所預(yù)測(cè)的細(xì)菌密度而定的，對(duì)總大腸菌群做濾膜試驗(yàn)應(yīng)過濾水樣的參考體積。一個(gè)理想的水樣體積，可以產(chǎn)生大約50個(gè)大腸菌群細(xì)菌菌落，而全部類別的菌落數(shù)則不超過200個(gè)。當(dāng)過濾水樣（稀釋的、或未稀釋的）體積少于20m1時(shí)，應(yīng)在過濾之前加少量的無菌稀釋水到過濾漏斗中，以便水量的增加有助于懸浮的細(xì)菌均勻分布在整個(gè)過濾表面。

③過濾：用無菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣，將粗糙面向上，貼放在已滅菌的濾床上，穩(wěn)妥地固定好濾器。將適量的水樣注入濾器中，加蓋，開動(dòng)真空泵即可抽濾除菌。

④培養(yǎng)皿：無菌的、密封保濕的塑料培養(yǎng)皿50mm×12mm。這種培養(yǎng)皿重量輕，不易破碎。緊急情況下，也可使用無菌的玻璃培養(yǎng)皿，但要用塑料薄膜或類似的材料包裝起來。

(2）水樣的保存和運(yùn)輸

①用滅菌鑷子把一片滅菌吸收墊放在一個(gè)滅菌的培養(yǎng)皿底部，并吸收足夠的、己選擇好的，在運(yùn)輸過程中可抑制大腸桿菌生長的運(yùn)輸培養(yǎng)基（如M-遠(yuǎn)騰氏防腐培養(yǎng)基或LES-MF保存性培養(yǎng)基），使墊片浸濕飽和（小心地吸去剩余培養(yǎng)基）。

②用滅菌鑷子從過濾設(shè)備上取下濾膜，放在已用運(yùn)輸培養(yǎng)基飽和過的吸收墊上。緊閉塑料培養(yǎng)皿就能保持高濕度，防止濾膜損失水分。注意運(yùn)輸途中不使濾膜脫水，但也不要使皿中有過多的液體。把放置有濾膜的培養(yǎng)皿放在適當(dāng)?shù)娜萜骼锼偷綄?shí)驗(yàn)室去做試驗(yàn)。運(yùn)輸時(shí)，樣品可在此種培養(yǎng)基上保持72h而無明顯生長。這種運(yùn)輸培養(yǎng)基可郵遞或普通方法運(yùn)送。當(dāng)遇到高溫時(shí)，偶然能在運(yùn)輸培養(yǎng)基上發(fā)現(xiàn)有菌落生長。

(3）轉(zhuǎn)移和培養(yǎng)

在實(shí)驗(yàn)室里，以無菌操作把濾膜從運(yùn)輸用的塑料培養(yǎng)基皿上移到含有M-遠(yuǎn)滕氏培養(yǎng)基或LES-遠(yuǎn)滕氏瓊脂培養(yǎng)基的第二個(gè)無菌的平皿中。

①M(fèi)-遠(yuǎn)騰氏方法：從M-遠(yuǎn)騰氏防腐培養(yǎng)基上把濾膜轉(zhuǎn)移到含有沒有抑菌劑的M-遠(yuǎn)騰氏培養(yǎng)基的吸收墊平皿中，在37℃±1℃培養(yǎng)20-22h。

②ES法：把濾膜從LES-MF保存性培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到LES-遠(yuǎn)騰氏瓊脂培養(yǎng)基里，在37℃±1℃培養(yǎng)20^22h.在轉(zhuǎn)移時(shí)，如果不用放大鏡已可觀察到清晰的菌落，則在放進(jìn)37℃±1℃的溫度培養(yǎng)16-18h之前，將含有轉(zhuǎn)移濾膜的培養(yǎng)皿先存放在5-10℃處。縮短培養(yǎng)時(shí)間是為檢驗(yàn)員提供一種控制細(xì)菌生長過度或菌落光澤消散的辦法，以免影響對(duì)大腸菌群的菌落計(jì)數(shù)。

3．總大腸菌群數(shù)的估算

挑選符合下列特征的菌落進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢。

紫紅色，具有金屬光澤的菌落；深紅色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紅色，中心色較深的菌落。

凡系革蘭氏陰性無芽孢桿菌，需再接種于乳糖蛋白陳培養(yǎng)液或乳糖蛋白膝半固體培養(yǎng)基（接種前應(yīng)將此培養(yǎng)基放入水浴中煮沸排氣，冷卻凝固后方能使用），經(jīng)37℃培養(yǎng)，前者于24h產(chǎn)酸產(chǎn)氣；或后者經(jīng)6-8h培養(yǎng)后產(chǎn)氣，則判為總大腸菌群陽性。計(jì)數(shù)濾膜上生長的大腸菌群菌落總數(shù)，根據(jù)過濾的水樣量計(jì)算1L水樣中總大腸菌群數(shù)。

總大腸菌群數(shù)（個(gè)／L)= 濾膜上生長的大腸桿菌菌落數(shù)×1000/過濾水樣量（ml)

濾膜上菌落數(shù)以20-60個(gè)/片較為適宜。